小动物组织器官取材及固定的操作规程

#小动物组织器官取材及固定的操作规程

一、目的

规范小动物组织标本取材及固定的操作程序和方法。

二、适用范围

大鼠、小鼠、地鼠、豚鼠等小动物的组织取材及固定的操作。

三、病理取材的一般原则

3.1 按照实验设计的要求取材，实验组和对照组动物的取材部位和数量应一致。

3.2取材部位和数量，应依据大体剖检时所见的各脏器的病变情况而定，准确地选择有代表性区域。一般情况下，每只动物应选取如下组织块：脑（包括大脑皮质、基底节、海马、丘脑、小脑、中脑、脑桥和延髓）、甲状腺、甲状旁腺、胸腺、心、主动脉、肺、肝、脾、左右侧肾、左右侧肾上腺、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、直肠、胰腺、肠系膜淋巴结、膀胱、左右侧卵巢、子宫、左右侧睾丸、左右侧附睾、前列腺、胸骨(骨和骨髓)、坐骨神经、乳腺、唾液腺以及注射部位的皮肤、血管和肌肉等。

3.3 所有的组织都必须留有足够的补做备份标本。

3.4选取组织块的刀刃必须锐利，切勿挤压或拉锯式切割组织；组织块厚度一般不应超过8mm，保留整个脏器时，应书页状切开。

3.5 死亡动物，按照SOPPAT008“死亡动物的解剖和检查”留取标本进行取材。

四、操作规程

4.1 根据实验的目的及脏器组织的特点，选择适宜的固定液，常规使用中性福尔马林固定液固定组织。

4.2 固定标本的容器为250~500ml的可密封瓶/袋，固定瓶外面贴上标签，注明课题号、课题名称、动物号、组别、性别、病理标本编号、动物种属及解剖日期。

4.3 固定液的量要充足，应为组织标本体积的10倍左右，以保证有足够的固定剂浸透至组织内，达到固定良好的目的。一般装有150 ml以上的10％中性福尔马林固定液。

4.4 每只动物的脏器组织标本放在一个容器中，为防止标本堆积固定不好，在固定初期12小时内，需要摇荡固定液2-3次。

4.5 选取的组织块不宜过厚过大，厚度不应超过8mm，宽度为1.0~2.0cm。选取整个脏器固定时，固定时间要适当延长，否则深部组织固定不佳，直接影响病理切片的质量。

五、几种组织固定的注意事项

5.1小动物脑应整脑固定，不宜切开，以免固定后变形，难以辨认脑组织的各个部位。

5.2对于脊髓组织的固定，将脊柱两侧的肋骨、背部肌肉及脊柱周围的软组织剪掉，取下胸和腰段脊柱，投入固定液。

5.3坐骨神经及视神经等，坐骨神经与周围结缔组织一同投入固定液中固定，视神经与脑一同投入固定液中固定。

5.4胃、肠道、和膀胱等器官的组织在固定液中易卷缩变形，切取部分肠段3cm左右，直接投入固定液中。

5.5肺组织块易漂浮在固定液表面，使肺固定不佳，可在液面上覆盖纱布或棉花，使肺组织浸透完全，固定良好。

5.6垂体等体积较小的标本，连同周围组织一同取下投入固定液中，也可将垂体放入网孔较小的包埋盒里或贴在滤纸片上固定，以免选块时丢失。

5.7胸骨(骨和骨髓)：取2节以上胸骨，投入固定液中固定。

5.8注射部位的皮肤、血管和肌肉等：取一块投入固定液中，注意切面应与皮肤表面垂直。

5.9其它如食管、气管、外周神经、垂体、视神经、眼球、内耳、口腔粘膜、咽壁组织和血管等的选材，应按照实验设计的要求而定。

六、附表

附表1 动物组织标本留取记录表。