石蜡切片免疫组织化学染色三步法

本文档详细描述了石蜡切片免疫组织化学染色三步法的标准操作流程，包括试剂准备、脱蜡、抗原修复、一抗孵育、二抗孵育、显色及复染等关键步骤，适用于病理实验室规范化操作。

石蜡切片免疫组织化学三步法病理技术SOP

#石蜡切片免疫组织化学染色三步法

1、目的

规范石蜡切片免疫组织化学染色三步法的操作流程，确保染色结果的稳定性和可重复性。

2.1 切片常规脱蜡至水。

2.2 3%H2O2孵育10分钟。

2.3 蒸馏水洗3分钟，3次。

2.4 抗原修复液进行抗原修复1-2次（用微波炉）。

2.5 0.01% mol/L PBS 洗3分钟，3次。

2.6 抗原修复液I滴加在切片上室温6分钟。

2.7 0.1M PBS 洗3分钟，3次。

2.8 山羊血清封闭，室温20分钟。倾去多余液体，勿洗。

2.9 滴加一抗工作液，37℃ 30分钟或4℃过夜。

2.10 0.1M PBS 洗3分钟，3次。

2.11 滴加生物素标记二抗工作液，37℃ 10-20分钟。

2.12 0.1M PBS 洗3分钟，3次。

2.13 滴加SABC，37℃ 20分钟。

2.14 用0.1M PBS配制的0.1% TWEEN-20 液洗5分钟，3次。

2.15 DAB显色，5-10分钟。

2.16 苏木素轻染30秒，分化10秒。

2.17 脱水、透明和封片。