病理切片的镜下检查

1. 目的

规范组织病理切片光镜下检查的技术操作。

2. 操作规程

2.1光镜下观察动物各脏器组织的病理改变，是大体检查的继续和深入，是进行病理诊断必不可少重要手段。对于大多数药物长期毒性试验，只有经过病理组织学检查，才能进一步确定药物毒性作用的靶器官，毒性损伤的部位、性质、程度、范围、特点、与药物剂量的关系及损伤的可逆性等情况。所以光镜检查能为药物毒性损伤提供更可靠的形态学依据。

2.2在镜下观察某种药物毒性试验的病理切片之前，应先仔细阅读该药物有关实验资料，包括实验设计、给药动物的临床表现、血液学、血液生化、骨髓涂片及免疫学检测结果、脏器系数及大体剖检各组动物脏器的肉眼所见等。查阅有关文献了解该药物或类似药物在不同种动物的毒性反应情况、毒性靶器官、毒性损伤的病理改变等，为镜下观察提供依据。

2.3按照试验分组，整理病理切片，将对照组与各实验组的切片分开，把即杀期与恢复期的切片分开，然后按照病理编号顺序将切片排列整齐。

2.4阅片时观察者最好先将所有组织切片在显微镜下浏览一遍，不做观察记录，使观察者对所有受试动物组织切片中反映的组织形态背景及病理形态信息有一初步印象和了解，然后再进行仔细观察和结果记录。

镜下检查的顺序，依次为对照组即杀期切片、高剂量组即杀期切片、对照组恢复期切片及实验高剂量组恢复期切片。

2.5镜下观察，先把病理切片的标记的内容照抄在“镜下病理检查记录表”上。然后观察切片，组织切片观察的原则是抓住重点、兼顾一般。首先对可疑靶器官的组织切片进行细致全面的有序观察，然后再观察其他器官，边观察边记录边照相，将观察结果及时准确地记录在病理组织观察记录表内。在病理切片观察中经常与有生化等指标改变或大体改变的动物进行对照比较，了解彼此是否吻合，及其吻合程度如何，通过比较，不断提高不同层次中病理检查阳性检出率。

2.6光镜下要掌握鉴别脏器组织中的哪些病变是属于动物自发性病变，与药物毒性损伤无直接关系；而哪些病变与药物毒性损伤可能或肯定相关。

2.7 镜下观察时要排除由于制片失当产生的人为假象，有些改变很难与病理改变相区别，干扰镜检结果的准确性。因此，需要认真观察，综合分析，进行鉴别。必要时重新切片染色或重新包埋制片染色，进行观察鉴别。

3. 病理诊断应考虑的基本依据

3.1 不同剂量组动物毒性病理学检查所出现的组织器官毒性病变当具备以下条件：即低剂量组动物无毒性；中剂量组也无毒性，或虽有毒性但病变程度较轻，其毒性病变的动物比例较低，停药后有这些病变的动物可以恢复；高剂量组动物可出现明显毒性病变且程度较重，有毒性病变动物的比例较高，停药后这些动物毒性变性可以恢复或不能恢复。实验组动物检出的毒性病变与对照组动物有明显差异，即对照组动物组织器官检查未见有任何病变。此时就可作出受试药物毒性具有时间－效应和剂量－效应的结论。

3.2当雌性或雄性受试动物的某个组织和器官出现明显的毒性病变，而异性动物与对照动物相应组织和器官无此病变，且这些毒性病变在该性别受试动物身上有明显的量效关系，此时可作出受试物对该组织和器官存在性别差异的结论。

3.3 如果不同剂量组动物和对照组动物均能检出某一毒性病变，但检出动物比例均较低，且病变表现为毫无量效、时间、性别等规律性特点，此时可作出此类病变与药物毒性基本无关，可能与受试动物本身某些自发性病变有关的结论。