胶原纤维和弹性纤维组合染色法

#胶原纤维和弹性纤维组合染色法

1、目的

规范胶原纤维和弹性纤维组合染色的操作程序和方法。

2、操作程序

2.1 中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

2.2 切片入70%乙醇中洗2分钟。

2.3 将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5～2小时。

维多利亚蓝染色液配制：维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。将上述试剂混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5分钟。然后用另一容器取30%三氯化铁溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中，继续煮沸3分钟，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g，放置至成熟后使用。

2.4 直接入95%乙醇中分色数秒钟。

2.5 浸入蒸馏水洗2分钟。

2.6 用丽春红S液滴染切片5分钟。

丽春红S染色液：0.5%丽春红15ml，加苦味酸饱和水溶液(1.22%)85ml。

2.7 直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次。

2.8 将切片在空气中或冷风干燥。

2.9 二甲苯透明，中性树胶封固。

3、结果

弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。

4、注意事项

4.1维多利亚蓝液反复使用效果不减，溶液在室温中保存可用数年。

4.2切片用乙醇分色，镜下控制纤维着色深度，如果颜色较深可以再分色。

4.3丽春红染色后，在脱水和透明过程中防止切片干燥。