分子实验
分子生物学实验技术服务
miRNA、mRNA、降解组整合分析
一、技术简介：转录组-小RNA-降解组联合分析的关键点是降解组的分析结果，降解组分析所用的miRNA序列是小RNA测序所鉴定到的全部miRNA，所比对的数据库是转录组测序所拼接得到的序列，通过降解组测序可以获得miRNA和靶基因的关系对信息。再通过miRNA-靶基因网络调控图可以直接展示miRNA调控多个靶基因以及同一个靶基因被多个miRNA调控的情况。通过将这三者数据进行整合分析，可以挖掘基因表
miRNA、mRNA、iTRAQ整合分析
一、技术简介： miRNA是一类长度约20-24nt的具有调控功能的非编码RNA，在生物体内，miRNA主要通过与靶基因mRNA结合，介导靶mRNA的翻译抑制（动物）或剪切降解（植物），而蛋白质作为mRNA的翻译产物，其表达量也会受到影响。通过研究miRNA-mRNA-蛋白质之间的相互作用关系，可以系统的研究基因表达调控机制。 二、技术路线： 三、分析内容： 1.三组学关联总表A.GO分析B.靶
荧光定量PCR检测
分子实验——荧光定量PCR检测 实验介绍 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 在常做的QPCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入
克隆载体构建
分子实验——克隆载体构建 实验介绍 构建克隆载体是指利用已有的载体，通过特定的技术手段将目标基因序列导入载体上，以便进一步研究。目前成品的载体很多，目的各不相同，有简单的中间TA载体，也有表达到动物、细胞系、植物、微生物等等个体中的终载体，分别进行例如过表达、敲除、沉默基因等功能，或者进行蛋白表达等。因此克隆载体构建也是机制研究中重要的一步。 实验步骤 （1）选择载体：常规
MLST实验
分子实验——MLST实验 实验介绍 多位点序列分析（MLST）是在多位点酶电泳的基础上提出的以核苷酸序列为基础的一种细菌分型方法，它们都是基于同一种属的细菌均含有保守性较高的“管家基因”，但对于不同的菌株，管家基因又会存在一定的变异位点。MLST则是对特定菌株确定其管家基因，通过对管家基因的测序获得该管家基因的等位基因型，这些等位基因型按照一定的顺序排序即可得到该菌株的序列型ST。 &nbs
SNP实验
分子实验——SNP实验 实验介绍 SNP即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性。通过常规PCR实验，对目标位点的片段进行扩增测序，再通过NCBI blast比对确定目标位点是否存在突变。 实验步骤 （1）DNA提取：按试剂盒方案进行； （2）PCR扩增目标片段：需要使用高保真酶，为确保测序数据真实性，引物设计需要在SNP位点上
Southern 杂交
分子实验——Southern 杂交 实验介绍 Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法，Southern Blotting是将基因组总DNA酶切，通过琼脂糖凝胶电泳分离，变性之后利用虹吸原理印记到固相支持物上（如尼龙膜），然后与变性的同位素标记探针特异性地在一定温度下退火，最后根据同位素标记情况分析杂交结果的分子生物学技术。 实验应用 Southern Blo
CRISPR/Cas9编辑载体技术
1、服务介绍：CRISPR/Cas9系统是当前最流行的基因编辑系统。该系统可用于各种复杂基因组的编辑，实现对特定DNA片段的敲除、嵌入，包括基因定点突变或整合、多位点突变和基因组片段的缺失等。相较于“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”等基因组定点编辑技术，CRISPR/Cas9系统具有更加高效、精准的优势，并且大大降低了脱靶机率，广泛的应用于植物基因组的精确修
微生物16S扩增子测序分析
（一）背景介绍 微生物多样性是基于 Illumina 测序平台，利用双末端测序（Paired-End）的方法， 构建小片段文库进行测序。通过对 Reads 拼接过滤，序列去噪或者OTUs（Operational Taxonomic Units）分组，并进行物种注释及丰度分析，可以揭示样品的物种构成；进一步进行α多样性分析（Alpha Diversity）、β多样性分析（Beta Diversit
RNA荧光原位杂交（FISH）
RNA荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）技术通过应用非放射性荧光物质标记的核酸探针，根据碱基互补配对原则，与组织或细胞内的目标RNA杂交，最后用荧光显微镜可直接观察到组织原位上一种或多种RNA的表达与分布。 该技术具有有效，快速，灵敏度高等特点，目前已广泛应用于免疫学，细胞遗传学，神经/代谢性疾病等领域。 科沿有道提供各种RNA荧光原