细胞检测常见问题解答

一、细胞增殖相关实验有哪些？

细胞增殖相关实验包括有MTT/CCK8、EdU掺入、（软琼脂）克隆形成和细胞周期检测。

MTT/CCK8：一般在基因表达水平干预、细胞因子或药物干预等条件下，培养细胞后加入MTT/CCK8，反应的是细胞总体代谢活力水平，通过多孔板光度计（酶标仪）获取数值，可绘制细胞的生长曲线。

EdU掺入：在细胞培养过程中EdU，通过DNA合成水平，反应细胞增殖状态及比例，后续通过荧光显微镜或流式细胞仪获取数据。

（软琼脂）克隆形成：不同干预处理的细胞，在培养孔板中或铺有低熔点琼脂糖的培养孔板中，培养2周左右观察其形成单克隆的能力。软琼脂克隆形成主要用于悬浮细胞，或者在研究贴壁细胞的抗失巢凋亡（anoikis）能力时。

细胞周期：实验细胞经过PI染色后，进行流式细胞术分析，可以获得细胞在各个细胞周期（G1/G2/M）的分布比例。

二、什么是Transwell迁移/侵袭？

Transwell小室上下层由聚碳酸酯膜分隔，膜上有3-8μm不同规格孔径的小孔。不铺Matrigel胶时细胞的穿膜过程体现其迁移能力；当铺有Matrigel胶时细胞穿膜需分泌基质金属蛋白酶（MMPs）等基质水解酶类，此时体现的是细胞的侵袭能力。所得数据为显微镜下拍照及细胞计数结果。

三、什么是Annexin V/PI双染？

Annexin V可特异性结合于凋亡细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸，PI只能穿透晚期/死亡细胞的细胞膜对核着色，使用Annexin V/PI双染可以将未凋亡、早期凋亡、晚期凋亡的细胞群体比例显示出来，数据通过流式细胞术或荧光显微镜获得。

四、什么是PI染色法？

DNA染料碘化丙啶PI（Propidium Iodide，PI）可以嵌入到DNA双螺旋碱基之间并与之结合，结合量与DNA的含量成正比，而PI的量是与荧光强度是成正比的，后者可以通过直方图中的通道数反应出来。

该实验用于肿瘤病理学中判断肿瘤的增殖状态和倍体分析；用于分析药物对细胞增殖的影响。

五、细胞类检测需要多少样品？

每一份独立样品的最低需要量，动物细胞＞1x10^7，动物组织＞400mg，植物组织＞2g。尽量提供更多样品，便于进行预实验、提高成功率。也要看样本类型和具体做哪种或哪几种实验，如果是采集困难或者特别珍贵的样本，需另外评估。

细胞可以提供培养瓶或冻存细胞，由我方验收后培养（或复苏）；也可以收取足量细胞后速冻、-80保存至寄送。

动植物组织样品需在离体后尽快液氮速冻、-80保存至寄送。植物组织尽量选取幼嫩新鲜部分。

样品寄送须使用足量干冰。