流式细胞周期

实验介绍：

细胞周期（cell cycle)：指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。

G0/G1期：有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上无法与G1期区分，细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。

S期：DNA开始合成，细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。G2期和M期：当DNA复制成为4倍体时，细胞进入G2期。

G2期细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。从DNA含量我们同样无法区分G2期和M期。

PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

实验应用：

（1）癌症研究：细胞周期的异常是许多癌症的特征之一。通过流式检测细胞周期，可以确定癌细胞的增殖状态，了解癌细胞的生长和分裂特性，以便研究癌症的发展机制，并寻找新的治疗方法。

（2）药物筛选：流式检测细胞周期可以用于筛选和评估药物的活性和效果。通过测量细胞周期的改变，可以确定药物对细胞增殖的影响，从而评估其抑制癌细胞生长的效果。

（3）细胞生物学研究：流式检测细胞周期可以用于研究细胞的生命周期和分裂机制。通过检测细胞在不同细胞周期阶段的比例和变化，可以了解细胞周期的调控机制和细胞分裂的过程。

（4）基因表达调控研究：细胞周期的进程受到多个基因的调控。流式检测细胞周期可以用于研究细胞周期相关基因的表达调控机制，了解这些基因在细胞周期中的功能和作用。

（5）细胞治疗监测：在细胞治疗过程中，流式检测细胞周期可以用于监测细胞的增殖状态和分裂能力，评估细胞治疗的效果和安全性。

总之，流式检测细胞周期的应用广泛，涉及到癌症研究、药物筛选、细胞生物学研究、基因表达调控研究和细胞治疗监测等多个领域。

实验步骤

1、细胞培养结束后，离心收集细胞，弃上清，加PBS清洗3-5次；

2、制备的单细胞悬液用体积分数为70％乙醇固定，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液；

3、将RNase A 与PI 1:9混匀，每个样本加入250ul，室温避光30min；

4、上机检测，记录激发波长488nm 处红色荧光。