分子互作之核酸与核酸互作

miRNA可以与mRNA结合调节体内基因的表达，通过影响蛋白的表达、修饰、酶活性等来调节生命活动的进行。lncRNA作为体内的ceRNA，可以与miRNA结合起到调节基因表达的作用。研究lncRNA与miRNA的相互作用对于研究生命具有重要的意义。通过MS2-RIP和灵敏度更高的双荧光素酶技术，来研究lncRNA和miRNA的相互作用。

 

一、MS2-RIP： MS2-RIP技术主要是应用针对GFP抗体的Protein G磁珠把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行q-PCR验证或者测序分析。

 

1.1实验流程： （1）载体构建及转染； （2）细胞裂解液获取及磁珠的准备； （3）RNA结合蛋白免疫沉淀； （4）RNA纯化； （5）RNA反转录及cDNA验证； （6）数据分析。

 

1.2实验例图： 

图. MS2- RIP实验原理图（表达Lnc-A的质粒富集miRNA1miRNA2的效率比不表达Lnc-A的MS2组明显提高。通过对照，说明MS2-A可以与miRNA1和miRNA2相互结合）

 

二、双荧光素酶报告系统： 双荧光素酶报告基因通常是一个报告基因作为内对照，使另一个报告基因的检测均一化。科沿有道应用Promega公司的双荧光素酶报告基因检测(DLR)系统，提供DLR检测服务。

 

2.1实验流程： （1）序列分析； （2）合成或者扩增目的片段亚克隆至目标载体； （3）报告基因质粒、转录因子共转染细胞； （4）荧光素酶反应发光； （5）结果分析。

 

2.2实验例图： 图.双荧光素酶和RIP验证lncRNA可以与miR-26a结合