比较蛋白质组学之iTRAQ定量分析

iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术，利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端和赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，是近年来定量蛋白质组学中应用广泛的高通量筛选技术。 一、技术特点： （1）自动化程度高：液质连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好； （2）灵敏度高：分级分离，降低样品复杂度，检测出较低丰度蛋白； （3）高通量：可同时对8样本（iTRAQ)或10样本(TMT)进行分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析； （4）结果可靠准确：定性与定量同步进行，同时得出鉴定和定量结果，重复样品间的蛋白表达量相关性高。   二、适用范围： （1）药物作用靶点研究； （2）疾病标志物筛选； （3）植物胁迫/抗逆研究； （4）作用机制研究； （5）物种蛋白质草图构建。   三、实验流程： （1）接受订单及样品； （2）蛋白酶解； （3）iTRAQ标记； （4）样品混合； （5）HPLC分组分； （6）LC-MS/MS； （7）数据解析； （8）结果交付。   四、需提供： （1）需比较的样品； （2）样品信息：需详细说明样品来源、含量、状态及其他基本信息。   五、结果交付： （1）实验报告一份，含具体实验流程及蛋白质组鉴定及定量结果（生物信息学分析）。 （2）生物信息学分析内容包括： ①iTRAQ鉴定：包括鉴定结果统计、重复性分析、Unique肽段数分布、肽段长度分布、蛋白覆盖度分布； ②iTRAQ定量：包括定量信息统计、蛋白质丰度比（FC）分布、表达量层次聚类分析； ③蛋白质功能注释：包括GO注释、COG注释和Pathway代谢通路注释； ④差异蛋白的富集分析：包括差异蛋白的GO富集分析、差异蛋白的Pathway富集分析。   六、实验周期： 自送样起50个工作日。