透射/扫描电镜送样注意事项

（一）透射电镜收样要求

一、组织样本：

(1)组织固定，体积尽可能小，一般要求1立方毫米大小，如果容易漂浮的组织样本，在管口用棉花塞住保证组织浸泡于2.5%戊二醛中，组织太大固定不充分，容易造成照片模糊或者结构溶解。 (2)组织取材要迅速，在几分钟内保存于戊二醛，保持结构完整性。 (3)组织在戊二醛中4℃保存1个月以内进行实验，不要存放太长时间。 二、细胞样本：

样本在收集后一定要肉眼可见方可进行实验，一般要求细胞量10^6以上。

(1)贴壁细胞：弃去培养基，PBS洗涤3次，每孔加入1mL 2.5%戊二醛固定1-1.5h，固定完毕后，用细胞刮轻柔的将细胞刮下，收集至1.5mL离心管内，取5μL在显微镜下观察细胞是否刮碎，如果细胞完整，则1000rpm离心5min收集细胞，加入1mL新鲜的2.5%戊二醛重悬置于4℃避光保存，一般保存1周进行实验。 (2)悬浮细胞：细胞离心收集后，加1mL 2.5%戊二醛混匀固定，4℃避光保存。 三、微泡、外泌体：

需要将微泡、外泌体分离出来，2.5%戊二醛重悬固定，2.5%戊二醛的量不要太多，100uL-200uL即可，保证微泡、外泌体的浓度便于观察寻找。

（二）扫描电镜收样要求

一、组织样本：

观察面朝上固定于支持物或者观察面朝上放置于管内（管状组织需要新鲜时切面剖开内面朝外固定于支持物）。 二、细胞样本：

(1)贴壁细胞：细胞需要接在爬片上，爬片直径在1cm以内，2.5%戊二醛固定，正面朝上，切勿将有细胞一面放反。 (2)悬浮细胞：细胞离心收集后，直接固定，实验过程中制备在支持物上。 三、微泡、外泌体:

需要将微泡、外泌体分离出来，2.5%戊二醛重悬固定，离心后的需要肉眼可见的量才可检测，外泌体如果直径太小，无法观察，一般观察200 nm-1000nm左右，常规可观察微泡。

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