透射电镜

病理染色实验——透射电镜

实验介绍

透射电镜（TEM）通过对组织细胞样本进行树脂包埋切片，60-80nm厚度的超薄切片，经过重金属铅、铀染色后于透射电子显微镜中进行几千至几万倍的放大成像，从而能够清楚的观察到在普通光学显微镜下无法看清的动植物细胞内的超微结构，比如线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体、自噬小体、凋亡小体、叶绿体、液泡、细胞内细菌或病毒侵染等结构及病理变化。透射电镜超薄切片除了能够显示细胞内的超微结构之外，还可用于观察病原微生物，如各类细菌真菌等。目前已经广泛应用于细胞生物学、组织学、病毒学、病理学、分子生物学、材料科学等诸多研究领域，是观察和研究物质超微结构的强有力工具。

 

实验步骤

（1）取材固定：新鲜组织确定取材部位，1-3min 内取样，取样组织1mm3大小，至装有新的电镜固定液的 EP 管内继续固定，4℃固定保存及运输。

（2）后固定：0.1M 磷酸缓冲液PB（PH7.4）配制的 1%锇酸避光室温固定 2h。0.1M 磷酸缓冲液 PB（PH7.4）漂洗 3 次，每次 15min。

（3）室温脱水：组织依次入 30%-50%-70%-80%-95%-100%-100%酒精上行脱水每次 20min， 100%丙酮两次，每次 15min。

（4）渗透包埋：丙酮︰812 包埋剂=1︰1 37℃ 2-4h， 丙酮︰812 包埋剂=1︰2 37℃渗透过夜， 纯 812 包埋剂 37℃ 5-8h。将纯 812 包埋剂倒入包埋板，将样品插入包埋板后 37℃烤箱 过夜。

（5）聚合：包埋板放于 60℃烤箱聚合 48h，取出树脂块备用。

（6）超薄切片：树脂块于超薄切片机 60-80nm 超薄切片，150 目方华膜铜网捞片。

（7）染色：铜网于 2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色 8min；70%酒精清洗 3 次；超纯水清洗 3 次；2.6%枸橼酸铅溶液避二氧化碳染色 8min；超纯水清洗 3 次，滤纸稍吸干。铜网切 片放入铜网盒内室温干燥过夜。

（8）透射电子显微镜下观察，采集图像分析。

实验案例