网状纤维染色方法

1、目的

规范网状纤维染色的操作程序和方法。

2.1 Gomori氏银染色法：

2.1.1 中性甲醛固定组织，石蜡切片脱蜡至水。

2.1.2 用高锰酸钾氧化液（高锰酸钾0.5g,蒸馏水95ml,再加入5ml 3%硫酸）5分钟。再用自来水洗1分钟。

2.1.3 用 2％草酸脱色2分钟，水洗2分钟。

2.1.4 2%硫酸铁铵媒染2分钟。

2.1.5 水洗1分钟，蒸馏水洗2次。

2.1.6 置下述银染液内1分钟。

取甲液5ml，滴加氨水至溶液清亮为止。再加入5ml乙液，此时该液突然变为黑色，再滴加氨水至清亮为止。补加4滴氨水，用蒸馏水加到50ml。

2.1.7 蒸馏水洗2次后，用20%甲醛还原5分钟。

2.1.8 蒸馏水洗2次。

2.1.9 0.2%氯化金液1分钟，蒸馏水洗2次。

2.1.10 用丽春红S苦味酸染色液复染3～5分钟。

2.1.11 直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2.1.12结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈黄色。

2.1.13注意事项：

配制氨性银溶液必须将器皿洗干净，滴加氨水时不能过量，此液应放在冷箱内保存备用。氧化液存放时间不能长，以免失去氧化作用。丽春红复染液一般须滴染方便，无水乙醇冲洗时要将切片倾斜，防止染液停留在切片上，以免使组织中的胶原纤维分布不均现象。

2.2 Jams染色法

2.2.1 中性甲醛固定组织，石蜡切片脱蜡至水。

2.2.2 2.5％高锰酸钾溶液氧化3～5分钟。

2.2.3 用5%草酸液漂白5～10分钟，蒸馏水洗3次。

2.2.4 入5%硝酸银中5分钟，蒸馏水洗3次。

2.2.5 入下液2分钟，蒸馏水洗3次。

把氨水一滴一滴加入20ml的10%硝酸银液中，边加边摇容器，直至滴加到最初形成的沉淀恰好溶解。注意，当这种沉淀物接近于完全溶解时，在每加一滴浓氨水期间，允许耽搁几秒钟，并轻摇容器，以免浓氨水加得太多。最好使沉淀物不要全部溶解。最后再加入一滴10%硝酸银和20ml蒸馏水。

2.2.6 5%甲醛液还原5分钟。

2.2.7 蒸馏水洗3次。

2.2.8 用丽春红苦味酸滴染3～5分钟。

2.2.9 直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2.2.10结果：网状纤维黑色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。

2.2.11注意事项

5%硝酸银液应冷箱内保存备用。在使用时不能滴染，应放在立式5片装染色缸内进行，防止银污染组织，银液染色后用蒸馏水浸洗较好。

二氨银带正电荷的离子状态，能够被具有嗜银性质的网状纤维所吸收，经过甲醛还原成金属银，所以说甲醛液要新配制，不能用陈旧性的溶液，防止影响银化合物还原金属银。