胶原纤维染色方法

1. 目的

规范实验动物组织切片胶原纤维染色的技术操作。

2. Mallory氏三色染色法

2.1 固定：Zenker氏液或Bouin液固定最好；如为甲醛所固定的组织，在切片染色之前可用（1）重铬酸钾-醋酸（重铬酸钾2.5g、醋酸5ml、蒸馏水95ml），加强媒染1小时以上。（2）或切片在含3%氯化汞的饱和酒精苦味酸液中媒染1小时以上，可加强染色。上述二种媒染剂可任选其中一种，（1）可省略脱汞步骤。

2.2 石蜡、冰冻和火棉胶切片均可用。

2.3 Mallory氏苯胺兰液配制：

先将50ml 1%磷钨酸水溶液倾入烧杯内，加入苯胺蓝0.5g，水浴加热溶解。再将50ml 1%磷钨酸水溶液倾入另一烧杯内，加入橘黄G 2g，加热溶解，冷却后分别过滤再将二液混合即成。

2.4 0.5%～1%酸性品红液配制

2.5 染色方法

2.5.1 切片脱蜡至水

2.5.2 经碘液和硫代硫酸钠，照常规清除汞盐沉淀。

2.5.3 自来水充分水洗，再蒸馏水洗涤。

2.5.4 Harris苏木素常规染色，以盐酸酒精分化，自来水冲洗至恢复天蓝色为止。

2.5.5 用0.5～1.0%酸性品红水溶液浸染,1-5min(亦可不用水洗直接苯胺兰液内)。

2.5.6 自来水洗30秒或较长，至纤维将近无色为止。

2.5.7 蒸馏水洗。

2.5.8 苯胺蓝液浸染，20min（勿水洗）

2.5.9 直接用95%酒精分化（镜下控制）。

2.5.10 无水酒精脱水，二甲苯透明。

2.6 结果：胶原纤维、网状纤维、碱性颗粒染成深蓝色；软骨、粘液、淀粉样物质，染成淡蓝色；纤维素、神经胶质、平滑肌纤维、酸性颗粒染红色；红细胞和髓鞘染橘黄色至橙红色；细胞核着紫蓝色。

3. Van Gieson（V.G）氏染色法

3.1 固定：10%甲醛、Zenker氏液或酒精固定的组织均可用。

3.2 石蜡、冰冻和火棉胶切片均可用。

3.3 VG染色液配制法：

用等体积蒸馏水稀释并煮沸3分钟，以使溶液“成熟”。该稀释液比不稀释的V.G染液较好。

3.4 Weigert氏铁苏木素溶液配制法：

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临用时，取甲液和乙液等量混合，即可应用。铁苏木素不能配制后放置，因铁与染色剂的色素根会化合而形成不溶性沉淀物，所以，以铁作为媒染剂时，必须与染液分别配制，分别应用或临用时混合应用。

3.5 染色方法

3.5.1 切片脱蜡至水。

3.5.2 浓染于Weigert氏铁木素溶液5-10min。

3.5.3 自来水充分冲洗。

3.5.4 V.G染5-10min。

3.5.5 蒸馏水速洗，用滤纸吸干（此步亦可省略）。

3.5.6 从染液内将切片取出，直接浸入95%酒精中分化数秒钟。

3.5.7 浸入纯酒精中脱水，二甲苯透明，树胶封固。

3.6 结果：胶原纤维红色、肌肉和神经胶质呈黄色，细胞核呈蓝色。