胶原纤维、网状纤维和弹性纤维三联染色方法

1、目的

规范胶原、网状和弹性纤维三重染色的操作程序和方法。

二、操作程序

2.1中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

2.2 高锰酸钾硫酸液氧化3分钟后，自来水浸洗，用2%草酸漂白2分钟。

高锰酸钾硫酸液： 0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。

2.3 5%硫酸铁铵处理1分钟。

2.4 Gomori氨性银改良液染1分钟。

Gomori氨性银改良液：取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。最后用蒸馏水补足至50ml，0～4℃避光保存，备用。

2.5 蒸馏水洗2次，用15%甲醛还原1分钟。

2.6 蒸馏水洗2次，0.2%氯化金30秒，蒸馏水洗1次。

2.7 70%乙醇浸1次，再浸入维多利亚蓝中染30分钟～１小时。

2.8 95%乙醇分化1分钟左右。

2.9 浸入蒸馏水中1分钟后，用丽春红S染色液染色2分钟。

丽春红S染色液：0.5%丽春红15ml，加苦味酸饱和水溶液(1.22%)85ml。

2.10 直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3、结果

胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹性纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈黄色。

4、注意事项

4.1氨性银液染色时，要用干净吸管，防止银液被污染而发生沉淀。

4.2氨性银液染色后，应用蒸馏水冲洗切片上的银液，以免银液表面蒸发后残留的银颗粒沉积在组织上。

五、附表

附表1特殊染色试剂配制表。