大动物组织器官取材及固定的操作规程

1 目的

规范大动物组织器官取材及固定的程序和方法。

2 适用范围

兔、狗、猴、猪等大动物的组织取材操作。

3 病理取材的一般原则

3.1 按照实验设计的要求取材，实验组和对照组动物的取材部位和数量应一致。

3.2取材部位和数量，应依据大体剖检时所见的各脏器的病变情况而定，准确地选择有代表性区域。一般情况下，每只动物应选取如下组织块：脑（包括大脑皮质、基底节、海马、丘脑、小脑、中脑、脑桥和延髓）、甲状腺、甲状旁腺、胸腺、心、主动脉、肺、肝、脾、左右侧肾、左右侧肾上腺、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、直肠、胰腺、肠系膜淋巴结、膀胱、左右侧卵巢、子宫、左右侧睾丸、左右侧附睾、前列腺、胸骨(骨和骨髓) 、坐骨神经、乳腺、唾液腺以及注射部位的皮肤、血管和肌肉等。

3.3 所有的组织都必须留有足够的补做备份标本。

3.4选取组织块的刀刃必须锐利，切勿挤压或拉锯式切割组织；组织块厚度一般不应超过1cm，保留整个脏器时，应书页状切开。

3.5 自然死亡动物，按照SOPPAT008“死亡动物的解剖和检查”留取标本进行取材。

4 操作规程

4.1 根据实验的目的及脏器组织的特点，选择适宜的固定液，常规使用中性福尔马林固定液固定组织。

4.2 固定标本的容器（固定瓶）为1000 ml或以上，固定液的容量要充足，应为组织标本体积的10倍左右，一般应装有600-700ml的10％中性福尔马林固定液。固定瓶外面贴上标签，注明课题号、课题名称、动物号、组别、性别、病理标本编号、动物种属及解剖日期。

4.3 每只动物的脏器组织标本放在一个容器中，为防止标本堆积固定不好，在固定初期12小时内，需要摇荡固定液2-3次。

4.4 选取的组织块不宜过厚过大，厚度不应超过1cm，宽度为1.0~2.0cm。否则深部组织固定不佳，直接影响病理切片的质量。

5 几种组织固定的注意事项

5.1大动物脑组织切开后固定3-4天后，选取脑组织标本。如有必要，可选择整脑固定7天左右。

5.2坐骨神经及视神经等，直接投入固定液中。

5.3胃、肠道、胆囊和膀胱等器官的组织可剪开后固定。

5.4肺组织块易漂浮在固定液表面，使肺固定不佳，可在液面上覆盖纱布或棉花，使肺组织浸透完全，固定良好。

5.5垂体等体积较小的标本，需要放入包埋盒里或用滤纸包裹后投入固定液中，以免选块时丢失或忽略。

6 各器官的取材方法

一般采用如下的取材方法，有病变时应多取组织，并取交界处的正常组织。

6.1心：切开的心脏可从左心室或右心室切一块组织（包括心内膜、心肌、心外膜）。如有病变切取病变与正常组织交界部位。

6.2 肺：从左肺下叶取一块，右肺下叶取一块。

6.3 肝：从肝的右叶取一块、左叶取一块组织（必要时右中叶一块、左中叶一块）。

6.4 脾：一般选择2块投入固定液中。

6.5肾：将两个肾切开，左肾从肾外侧缘向肾门作一纵切面，右肾从肾门向肾外缘作一横切面。各取一半投入固定液中固定。

6.6肾上腺：将两个肾上腺全部投入固定液中。

6.7胃：从胃窦部和胃体部选一块纵切面。

6.8十二指肠、空肠、回肠、结肠及直肠：一般各取1段肠管，长约2-3cm，投入固定液中。

6.9胰腺：胰腺与十二指肠一同取下，投入固定液中固定，必要时另取一块胰尾投入固定液中。

6.10胸腺：纵切一块投入固定液中。

6.11肠系膜淋巴结：回肠壁集合淋巴结一块，切开固定。

6.12甲状腺：将两个甲状腺投入固定液中固定。

6.13膀胱/前列腺：膀胱剪一小口后，同前列腺一起投入固定液中固定。

6.14卵巢：两个卵巢全部投入固定液中固定。

6.15子宫：一般将整个子宫取下投入固定液中，或纵切一块投入固定液中。

6.16睾丸/附睾：将左右睾丸与附睾分离后，均投入固定液中固定。

6.17脑：一般取大脑皮质（中央前回部位），必要时基底节、视丘、海马、枕叶（距状裂）、小脑、中脑、脑桥和延髓各一块。

6.18脊髓：在颈膨大、胸和腰膨大各作横切面，检查有无改变。从此三段取材制片。坐骨神经及视神经等，直接投入固定液中。

6.19胸骨(骨和骨髓)：一般取第2或第3节胸骨，至少一端露骨髓，投入固定液中。

6.20注射部位的皮肤、血管和肌肉等：取1-2块投入固定液中。

6.21其它如食管、气管、垂体、视神经、外周神经、眼球、内耳、口腔粘膜、咽壁组织和血管等的选材，应按照实验设计的要求而定。

7 附表

附表1动物组织标本留取记录表。