免疫荧光染色

病理染色实验——免疫荧光染色

实验介绍

免疫荧光单标标记即利用抗原抗体特异性结合原理，在一张切片上的一个抗原进行荧光标记，从而实现定位，定性，半定量的分析，由于抗体的种属来源不同还可以做免疫荧光双标或者三标染色，根据免疫荧光多标染色试剂盒方法可以最多做到七色。

实验步骤

（1）用4%的多聚甲醛固定细胞爬片15min， PBS浸洗玻片3次； （2）在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min； （4）滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

（5）加荧光二抗： 滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次；

（6）复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；

（7）用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察。

 

实验案例