Tunel染色

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实验介绍：

细胞凋亡中染色体DNA的断裂是一个渐进的分阶段过程，DNA在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300KB的大片段，然后在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶下形成180-200bp核小体DNA多聚体。DNA双键断裂或出现缺口，就会产生一系列DNA的3’-OH末端，在末端脱氧核苷转移酶的作用下可以将荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶等物质标记到末端从而检测细胞凋亡情况，最终利用荧光显微镜或者普通显微镜检测即可。

实验应用

TUNEL是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征；可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用

实验步骤

（1）细胞爬片多聚甲醛固定（或者石蜡切片制作）；

（2）PBS清洗后，加入含有0.3% Triton X-100的PBS，室温孵育5min；

（3）PBS再次清洗，用含3%过氧化氢溶液的PBS室温富裕20min，灭活样本内源的过氧化物酶；

（4）在样本中加入50ul Tunel染色液，37℃避光孵育60min；

（5）PBS清洗1次后，加入0.1-0.3ml标记反应终止液，孵育10min；

（6）PBS清洗3次后，加入streptavidin-HRP，室温孵育30min;

（7）PBS清洗3次，加入DAB显色液，孵育5-15min后，PBS清洗封片观察。

案例图片