RIP/CLIP测序送样要求

为确保所提供的样品在经过标准生产实验后能够得出满足要求的高质量数据，请按照本要求制备您的样品。 （一）细胞样品送样标准 1.细胞量：

5×10^7个培养的细胞，细胞干体积≥200uL。 a.核定位RNA结合蛋白： 每个实验请提供干体积300uL以上的细胞，并务必提供一管干体积为20uL的预实验样品。 b.质定位RNA结合蛋白： 每个实验请提供干体积100uL以上的细胞，并务必提供一管干体积为20uL的预实验样品。 Note： 1)15cm培养皿培养的Hela细胞，90%的汇合度（confluency）时，大约可以获得干体积100~150uL的细胞，约2×10^7个细胞。

2)建议送样细胞数目≥4×10^7，细胞数目达5×10^7尤佳，即三个15cm的培养皿或8个10cm培养皿培养的细胞（1个15cm培养皿相当于三个10cm培养皿的细胞量）。

3)每次实验的样品请单独分装，避免冻融。细胞冻融之后，实验失败的风险大大增加。 2. 细胞收样要求: 请根据上述细胞量要求确定铺板的数量。在细胞生长至90%的汇合度时收样，过高的汇合度将影响下游实验。建议在收样前一天铺板，请根据细胞生长速度自行决定铺板密度，并务必保证在铺板24h之后收样时的细胞汇合度约为90%。 细胞收集步骤:

a.吸干培养基，用冰预冷的1×PBS将细胞洗三遍，弃掉液体。 b.吸干液体，加入适量冰预冷的1×PBS，用细胞刮将细胞刮下，转移到15mL离心管中，4℃，1000g离心5min收集细胞。 c.将上清吸干，将细胞重悬于1mL冰预冷的1×PBS中，转移至1.5mL离心管中，4℃，1000g离心5min收集细胞。 d.尽量吸干上清，将细胞放入液氮中冻存。 3.运输保存：

直接干冰运输。

（二）动物组织送样要求 1.组织大小：

总量大于500mg。

2. 取样要求: 建议先用生理盐水将组织的血水冲洗干净，然后用剪刀将组织剪成小块，可以防止后期RNA提取过程中，在剪组织时造成的降解。 3.运输保存：

直接干冰运输或者放入trizol中干冰运输。

（三）植物组织送样要求 1.组织大小：

总量大于500mg。

2. 取样要求： a.叶片组织使用无菌水冲洗后擦干水分，然后用锡箔纸包好，放液氮速冻； b.根、茎、块等较大的组织取样后，迅速剪成小块并装入1.5mLEP管。强烈建议将新鲜组织剪成小块，特别是组织较大、较硬的样本。 c.迅速置入液氮中速冻1min，在液氮中或转移至-80℃冰箱长期保存。 3.运输保存：

直接干冰运输。

（四） IP后的RNA送样要求 1.RNA浓度>10ng/uL（Qubit检测结果），RNA总量>50ng；

2.Agilent2100检测片段长度分布峰值在200bp~1kb之间。 （五） 样品运输 1. 样品包装： a.建议尽量用1.5mL的离心管装载样品，并将离心管装在50mL离心管（或其他支撑物）中，里面还可以添加棉花、泡沫、报纸等固定，以防止离心管在运输过程中受到挤压破裂，导致样品损失。 b.在样品运输过程中请用parafilm膜将管口密封好，不建议样品溶于无水乙醇、异丙醇等有机溶剂邮寄，因为比较容易泄露、甚至可能导致样品的交叉污染，如果一定要样品溶于有机溶剂运输，那么离心管的管口至少要用parafilm膜封10圈以上。

2. 样品标识： a.不要用油性笔直接在管壁或管盖上写样品名称等信息，最好用油笔将样品名称等各种信息写在标签纸上，贴在管壁，外面再用透明胶带缠绕一圈（一方面防止样品名称被泄露的有机溶剂溶掉，另一方面也可以防止标签纸没有粘牢脱落，导致样品无法应用）； b.送寄样品时，须提供样品信息单，务必保证信息单中填写的样品名称、数量需要与实际送寄的样品名称标识、样品数量完全一致。

3. 样品运输条件： a.细胞、菌体和冻存组织样品保存在液氮中速冻后，用干冰运输； 注意：运输过程中需要添加的干冰和冰袋的量跟季节、运输时间长短、泡沫盒的薄厚有关（为更有利于保温，如果条件允许，建议可在邮寄的泡沫盒的上下填充一些棉花等，以保证尽量隔绝热量的传递）； b.样品运输、接收 在送样者寄送样品前应及时通知收样人，告知包括样品信息单（以便样品到达后及时登记处理），样品保存条件（干冰或常温）及样品到达的大概时间（最好不要在周末和法定节假日，以便样品第一时间得以处理）。